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拟南芥中精氨酸脱亚胺酶的克隆,表达及其有效合成

08
11月
克隆和表达Corynebacterium deiminasa crenum精氨酸及有效合成瓜氨酸L-
刘千金
摘要:瓜氨酸L-(L-瓜氨酸,L-Cit)在治疗疾病,炎症,败血症和其他尿素循环中发挥作用,广泛用于制药和保健行业。
精氨酸脱亚胺酶(精氨酸脱亚胺酶)可水解为L-精氨酸,L-瓜氨酸,治疗癌症和白血病的前景。
粪便本研究完成(粪肠球菌)来源deiminase在Corynebacterium crenatum(Corynebacterium crenatum)SYPA 5-5中高度表达,重组全细胞转化用于生产瓜氨酸L-酸,全细胞转化-L发酵罐将扩增的全细胞转化为5和5优化。
主要内容总结如下。
进行测序以通过PCR和正确连接和重组质粒pXMJ19C确认编码编码arcA的精氨酸脱亚胺酶基因的粪便。
克隆在crenatum SYPA5-5中的表达
重组C.I.
crenatum SYPA5-5 / pXMJ19-arcA3的活性。
40 U,1其酶活性。
39 U?Mg?( - 1),Corynebacterium crenatum的亲本菌株未检测到脱亚胺酶活性。
(2)Corynebacterium crenatum纯化的镍重组精氨酸脱亚胺酶,用于破坏亲和层析细胞上清液的纯化重组酶为0。
27 U,它比酶大3。
38 U?Mg?( - 1)。
酶性质表明纯化酶反应的最佳pH为6。
5.最佳温度为37℃,1mmol?L?( - 1)Mn?(2+)起促进活性的作用,1mmol?L?( - 1)Cu?Zn(2+)显着抑制重组酶活性。
pH 5重组脱亚胺酶精氨酸。
0?7。
在0和0至37°C之间具有良好的稳定性。
Michaelis Km的恒定重组脱亚胺酶为12。
18 mmol?L?( - 1),最大速度Vmax为0。
36μmol·min?( - 1)?ML?( - 1)。
(3)使用重组细菌C.
L-瓜氨酸L-精氨酸L-瓜氨酸生产的crenatum SYPA5-5 / pXMJ19-arcA转化穿过底物,优化其转化条件。
结果,整个转化细胞的最适温度为37℃,初始转化率为pH6。
加入L-精氨酸?L?( - 1),浓度为5-300g,缓冲液为零。
02 M磷酸盐缓冲液。
在优化的条件下,总细胞转化的L-瓜氨酸产量,L-瓜氨酸300产量为36小时。
52克?L?( - 1),生产率为8。
33g≤L≤(-1)→H-1,摩尔转化率为99。
6%
(4)重组细菌
在5L发酵罐中培养的Crenatum SYPA5-5 / pXMJ19-arcA通过IPTG优化其长诱导时间和诱导结果,并且当通过添加IPTG 30小时诱导18小时诱导发酵和重组酶活性的诱导高是
在该重组菌株的转化条件下,产生全纤维素L-瓜氨酸和用大量批次转化的细胞,结果显示在细胞中:252 H 6转化,精氨酸L-逆转1800g?L - ( - 1)。),共有7个平均生产率,共生产1685克瓜氨酸L-?L-(?1)。
14g·L -1(-1)→H 2(-1),摩尔收率为99。
6%,摩尔转化率为93。
1%
[成绩单]:[恩南大学本科课程:教师评估[年]:[2017]CLC:TQ 920。
1; Q55
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  • 生产日期:2019年11月08日 12点30分
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